非標定量（Label-free）

非標定量（Label-free）：

非標定量是一種非標記的差異蛋白質組學技術，不需要使用同位素標記物標記肽段，直接根據質譜峰的信號強度來對肽段或蛋白進行相對定量。Label-free通過HPLC分級液質聯用對酶解肽段進行分析，現在基于質譜的非標定量技術主要有兩種：一是根據一級質譜相關的肽段峰強度以及峰面積等信息進行蛋白定量，二是根據蛋白對應肽段的二級質譜總數（spectral counts）進行定量。

采用穩定同位素標記定量的方法，能夠精確的對蛋白表達水平進行定量分析。然而，標記定量的方法也存在某些不足之處：包括，額外的樣品處理過程，昂貴的標記試劑，不完全標記導致樣品復雜化，低豐度多肽難以檢測，可標記樣品數量有限等。作為替代，非標記定量技術（LFQ，label-free quantification）能夠避免此類缺陷。

LFQ定量通?？刹捎脙煞N方式：

（1）譜圖計數法（Spectral counting），使用多肽被鑒定次數來代表對應多肽的相對含量，進而計算出對應蛋白的相對表達量；

（2）母離子強度（precursor ion intensity），提取鑒定到的多肽在一級質譜（MS1）中的色譜峰面積代表其相對含量，然后計算出對應蛋白的相對表達量。和標記定量技術不同在于：標記定量樣品預先混合并同時進行LC-MS/MS檢測，而LFQ技術要求每個樣品獨立進行制備和LC-MS/MS檢測，因此準確性和通量弱于標記定量技術。

實驗步驟

1.蛋白前期處理，包括去除核酸，蛋白純化定量，SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳；

2.蛋白質膠內酶切；

3.多肽純化；

4.多肽混合物的質譜分析，包括質譜鑒定和定量信息比較；

5.生信分析。

結果展示