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    熒光DAPI染色

    一、實驗原理

           DAPI 為一種熒光染料,可以穿透細胞膜與細胞核中的雙鏈DNA結合而發揮標記的作用,可以產生比DAPI自身強20多倍的 熒光,和EB相比,對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍色熒光的細胞,熒光顯微鏡觀察細胞標記 的效率高(幾乎為100 %) ,且對活細胞無毒副作用。DAPI染色常用于細胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。 DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細胞經熱激處理后用DAPI染色3分鐘,在熒光顯微鏡下可以看到到細胞核的形態變化。 

    二、實驗過程 

    1、用PBS按照1(原液):5000(PBS)稀釋DAPI原液 

    2、吸去細胞怕片上的細胞培養基,PBS清洗三次(不能讓細胞干透) 

    3、用3.7%甲醛固定細胞10min 

    4、吸去固定劑,用PBS沖洗三次,每次5min 

    5、用0.2% Triton X-100使得細胞透化處理5min 

    6、吸去Triton,PBS清洗3次,每次5min 

    7、DAPI工作液室溫下染色1-5min 

    8、吸去工作液,PBS清洗三次。 

    9、成像


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